1、DNA重组技术：实现这一精确的操作过程至少需要三种工具，即准确切割DNA的“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）、将DNA片断再连接起来的“分子缝合针”——DNA连接酶、将体外重组好的DNA导入受体细胞的“运输工具”——运载体。 2、限制酶：主要从原核生物中分离纯化出来，能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。形成黏性末端和平末端两种。 3、DNA连接酶：根据酶的来源不同分为两类：E.coliDNA连接酶、T4DNA连接酶。二者都是将双连DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 4、常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒。质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌染色体之外并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。 5、基因工程的基本操作步骤主要包括四步：目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。 6、基因表达载体的构建是实施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。其目的是：是目的基因在受体细胞中稳定存在并且可以遗传给下一代并表达和发挥作用。其组成是：目的基因、启动子、终止子、标记基因（鉴定受体细胞是否含有目的基因，便于筛选）。 7、受体细胞有植物、动物、微生物之分。 8、目的基因导入受体细胞后，是否可以维持和表达其遗传特性，只有通过检测与鉴定才能知道。这是基因工程的第四步工作。 9、将目的基因导入植物细胞的方法：农杆菌转化法、花粉管通道法、基因枪法。 10、将目的基因导入动物细胞的方法：显微注射技术。 11、将目的基因导入微生物细胞：用CaCl2处理，增大细胞壁的通透性。 12、检测目的基因是否插入到受体细胞的基因组中，是否转录出mRNA的方法：DNA分子杂交技术（用目的基因做探针，如果显示出杂交带则成功）。 13、检测目的基因是否翻译成蛋白质的方法：抗原——抗体杂交。 14、除了分子检测外，有时还需要进行个体水平的鉴定，方法是：抗虫或抗病的接种实验。 15、目的基因的获取：从已有物种中直接分离，也可以人工合成。 16、目的基因：主要是指编码蛋白质的结构基因，也可以是一些具有调控作用的因子。 17、PCR是聚合酶链式反应的缩写，是一种在生物体外复制特定DNA片断的核酸合成技术。其原理是：DNA双连复制的原理。前提是：要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物（两种）。过程是：高温变性、低温复性、中温延伸。 18、植物基因工程硕果累累：抗虫转基因植物，抗病转基因植物，抗逆转基因植物，利用转基因改良植物的品质。 19、动物基因工程前景广阔：用于提高动物的生长速度，用于改善畜产品的品质，用转基因动物生产药物，用转基因动物做器官移植的供体，基因工程药品异军突起。 20、基因治疗：是把正常基因导入病人体内，使该基因的表达产物发挥功能，从而达到治疗疾病的目的。这是治疗遗传病的最有效的手段。其中效果比较可靠的是体外基因治疗。 21、基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质，蛋白质工程是指以蛋白质的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有的蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。 22、蛋白质工程的基本途径：从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找出相对应的脱氧核苷酸序列（基因）。 23、具有某种生物全部遗传信息的任何一个细胞，都具有发育成完整生物体的潜能，也就是说，每个生物细胞都具有全能性的特点。 24、植物细胞工程：植物组织培养技术（基础）、植物体细胞杂交技术。 25、细胞脱分化：就是让已经分化的细胞，经过诱导后，失去其特有的结构和功能而转变成未分化细胞的过程。创伤和外源激素可以使外植体细胞的合成代谢加强，不断分裂增殖形成愈伤组织。 26、植物组织培养就是在无菌和人工控制条件下，将离体的植物器官、组织、细胞，培养在人工配制的培养基上，给与适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整植株。 27、植物体细胞杂交就是将不同种的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培养成新的植物体的技术。 28、植物细胞工程的实际应用：植物繁殖的新途径（微繁、作物脱毒、制造人工种子）、作物新品种的培育（单倍体育种、体细胞诱变育种等）、细胞产物的工厂化生产（人参细胞发酵罐生产人参皂苷）。 29、动物细胞工程常用的技术手段有：动物细胞培养（基础）、动物细胞融合、动物细胞核移植、生产单克隆抗体等。 30、动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（胰蛋白酶或胶原蛋白酶），然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 |
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